产品货号:
LA11069
中文名称:
Taq DNA聚合酶
英文名称:
Taq DNA Polymerase(Mg2+ plus Buffer)
产品规格:
1000U|5×1000U|10×1000U
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本产品由克隆有Thermus aquaticus DNA Polymerase基因的大肠杆菌表达并经过多步纯化精制得到,不含外源核酸酶以及宿主细菌DNA。Taq DNA Polymerase具有5’→3’聚合酶活性和5’→3’外切酶活性,无3’→5’外切酶活性。扩增产物具有3′-dA,可直接用于TA克隆。
本产品广泛适用于基因型鉴定、菌落PCR、荧光定量PCR等。
用活化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,74℃ 30min内,掺入10nmoL的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个单位。
组分 | 1000U | 5×1000U | 10×1000U |
Taq DNA聚合酶 | 200μL | 5×200μL | 10×200μL |
10×Taq Buffer(with Mg2+) | 4×1mL | 20×1mL | 40×1mL |
说明书 | 1份 |
保存:-20℃,有效期2年。
SDS-PAGE检测条带单一,经检测无外源核酸酶活性,PCR检测无宿主残余DNA,能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因。
- 操作注意事项
由于Taq DNA Polymerase在室温下也有一定的反应活性,PCR反应体系请在冰上进行配制,之后再置于PCR仪上进行反应。这样可以减少在反应准备阶段发生的非特异扩增,有助于得到高特异性的扩增结果。 - 引物设计要点:
- 引物3’端最后一个碱基最好为G或者C;
- 引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配;
- 引物3’端应避免出现发夹结构;
- 正向引物和反向引物的Tm值相差不超过1℃为佳,Tm值调整至55~65℃为佳(引物Tm值推荐使用Primer Premier 5进行计算);
- 引物额外附加序列,即与模板非配对序列,不应参与引物Tm值计算;
- 引物的GC含量控制在40~60%之间;
- 引物A、G、C、T整体分布要尽量均匀,避免使用GC或者AT含量高的区域;
- 避开引物内部或者两条引物之间有5个碱基以上的互补序列,两条引物的3’端避免3个碱基以上的互补序列;
- 引物设计完毕请使用NCBI BLAST功能检索引物特异性,以避免非特异性扩增产生。
- 引物3’端最后一个碱基最好为G或者C;
- PCR反应体系
成分 用量 ddH2O 至50μL 10×Taq Buffer(with Mg2+) 5μL dNTP Mix (10mM each) 1μL 模板DNA optional 引物1(10μM) 2μL 引物2(10μM) 2μL Taq DNA Polymerase(5U/μL) 0.5~1μL
注:- Mg2+终浓度:本品已含有2mM Mg2+,如有需要,可适当调整Mg2+浓度至2~4mM。
- 聚合酶添加:室温下聚合酶有一定程度的5’-3’聚合酶活性,为了防止非特异性扩增,建议将聚合酶在最后一步加到反应体系中。
- 聚合酶量:推荐使用0.5μL。可以在0.25~1μL之间进行优化。
- 不同模板的推荐使用量(50μL反应体系):
模板种类 扩增片段 基因组DNA 100ng~1μg 质粒DNA 10pg~20ng cDNA 1~5μL(不超过反应体系的1/10)
- Mg2+终浓度:本品已含有2mM Mg2+,如有需要,可适当调整Mg2+浓度至2~4mM。
- PCR扩增程序
循环步骤 温度 时间 循环数 预变性 94℃ 30sec~3min 1 变性 94℃ 20~30sec 30-35 退火 50~60℃ 30sec 延伸 72℃ 1~2kb/min 终延伸 72℃ 5~10min 1
注:- 预变性温度和时间:推荐使用94℃。预变性推荐时间:质粒DNA等简单模板为30sec;cDNA、基因组DNA等复杂模板为3min。
- 退火温度和时间:推荐使用50~60℃,也可根据需要,设立温度梯度去摸索引物退火的最适温度。推荐退火时间设置为20sec,可以在10~30sec内调节。退火时间太长可能导致扩增产物在胶上呈弥散状。
- 扩增产物:请将PCR扩增产物放置于-20℃保存,防止DNA发生降解。
- 预变性温度和时间:推荐使用94℃。预变性推荐时间:质粒DNA等简单模板为30sec;cDNA、基因组DNA等复杂模板为3min。
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